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光密度(OD)法测定绘制大肠杆菌的生长曲线

OD是optical density(光密度)的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度。细菌培养液OD值是根据细菌悬液细胞数与透光度成反比的关系,利用紫外分光光度计测定细胞悬液的光密度(即OD值),用于表示该菌在一定实验条件下的相对生长量。

将一定数量的细菌,接种于适宜的液体培养基中,在适温条件下培养,定时取样测量,以菌数的对数为纵坐标,生长时间为横坐标,作出的曲线称为生长曲线。该曲线表明细菌在一定的环境条件下群体生长与繁殖的规律。一般分为延缓期、对数期、稳定期及衰亡期四个时期,各时期的长短同菌种本身特征、培养基成分和培养条件不同而异。

具体实验步骤如下:

1、接种细菌

取24支装有5ml LB培养液的试管,按无菌操作法向每管加入0.2 mL大肠杆菌培养液,接种后,轻轻摇荡,使菌体混匀。另用一支不接种的培养管作为对照。

2、培养与测量

将接种后的培养管置于摇床上,在37℃下振荡培养。每隔30min取出一管,以未接种的LB培养液调零点,用紫外分光光度计检测波长为600nm时的OD值。

3、绘制曲线

以细菌悬液的光密度值(OD600值)为纵坐标,培养时间为横坐标,绘出大肠杆菌的生长曲线。

如果将上述不同测量点的细菌悬液用平板稀释法进行活菌计数,测出不同时间点的含细菌数(CFU),以菌悬液比浊的光密度值为横坐标,以细菌的数量为纵坐标,绘制一标准曲线,这样在测得了任一培养时间的菌悬液光密度值后,就可以在此标淮曲线上查出细菌数。这种方法已在工业上广泛采用,它可以节省许多稀释平板测数的时间,  直接用测得的吸光度对照标准曲线以了解各个培养时期的细菌数消长情况。

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